第三幕：在威尼斯大运河上的一座宫殿里，交际花古丽叶塔与尼克劳斯一同唱着欢快的船歌。一边的霍夫曼精神不佳。古丽叶塔的新情人夏勒米尔嫉妒的承认她对霍夫曼的倾心。古丽叶塔邀请她的客人去游戏室，但尼克劳斯退在后面警告霍夫曼要当心交际花所提出的要求。霍夫曼否认自己对古丽叶塔的兴趣。听到他们谈话的魔法师达佩图特用一颗巨大的钻石诱惑古丽叶塔同意偷取霍夫曼的影子，已经得到夏勒米尔影子的古丽叶塔收下了钻石。原本要离去的霍夫曼被古丽叶塔挽留下来，不久便受到她美色的吸引而爱上了她，在一曲激情的二重唱之后，她提出了达佩图特的要求。这个时候夏勒米尔过来，他指责古丽叶塔的移情别恋，霍夫曼脸色苍白，他无意间在一面镜子里发现可怕的事情，他没有了影子。当众人离去，霍夫曼向夏勒米尔要求古丽叶塔房间的钥匙，被拒绝后他与夏勒米尔决斗，由于达佩图特暗中相助，霍夫曼轻松的将夏勒米尔杀死。从情敌处得到钥匙，霍夫曼冲进了古丽叶她的房间，却发现里面空无一人。当他走出古丽叶塔的宫殿，看见古丽叶塔与达佩图特共坐于凤尾船中远去，意识到自己被骗的霍夫曼十分后悔，尼克劳斯将他扶走。