第四幕：在San Juste 修道院，Elisabeth 在先王 Charles V 的墓前祈祷 （歌曲：Tu che le vanità）。Elisabeth 即将辞世，Don Carlo 必须顺从他的命运。Don Carlo 这时候出现，向Elisabeth 作最后道别。国王及异端裁判官到达，国王将会把他的儿子交给异端裁判所。这个时候，在先王Charles V 的墓里，走出了一个僧侣的，带领Don Carlo 逃到安全的地方。