第二幕，阿尔卑斯山的深谷中。这是历史上有名的组成“瑞土同盟”的段落，据说罗西尼作曲时特别用心。接近黄昏，此处可以俯视琉森湖的琉特里山岗。猎人们下山回家，做完工的村人们，随着远方传来的钟声唱出了《晚祷之歌》。一队猎人的号角响遍森林，引起牧童们的合唱。格斯勒的女儿玛蒂尔德单独离开猎人群，面带忧郁痴痴地等候恋人阿诺尔德的到来。现在阿诺尔德占据这位美丽姑娘心田的，她猜想过一会儿阿诺尔德就会来到，于是唱出浪漫曲《阴暗的森林，寂寞的荒野》，吐露自己对阿诺尔德的思念。阿诺尔德终于出现。悲伤寂寞的玛蒂尔德马上转悲为喜，但是她明白彼此身份悬殊、担心会因此伤害她的阿诺尔德，却无法坦然地亲近她。在二重唱 《你从我心灵搜取了秘密》。中，玛蒂尔德发誓说：“无论发生什么事，我都要留在你身旁，爱你不渝。”这些话终于使阿诺尔德放心了。他们发觉有人来了，玛蒂尔德约好再见时间后急速退场。此时来到这里的是坚强的爱国者威廉和福尔斯特。他们已经偷听到阿诺尔德和玛蒂尔德的对话，便开始向阿诺尔德灌输祖国之爱，但是阿诺尔德却表示准备和玛蒂尔德开此地。这时威廉和福尔斯特才告诉他，父亲梅尔希塔尔已经被格斯勒的部下杀死。一听到受人尊敬的老父亲，居然无罪被杀，一直只被玛蒂尔德魅力束缚的阿诺尔德的心理阻碍一下子就被打破了。他思念慈祥的父亲，感到的后悔与内疚，脑海了闪现出强烈的复仇之念。三人一起发誓要为瑞士解放运动而献身，勇往直前。这时从附近森林有很多人的脚步声越来越近。他们到这里集合开会，商谈着如何尽快向该格斯勒反击推翻暴政。当威廉说明大略的计划时，开始有人动摇，有人提出异议，后来经过威廉的动员，再加上大家知道了梅尔希塔尔老人被杀的沉痛事件决心更加坚定。聚集而来的人就以威廉等三人的三重唱为中心，唱出雄壮的男声合唱，发誓逐出外国的统治者，立志消灭暴政，勇敢地高喊着：“拿起武器!”。